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SPIM / AFM Fluo - IX 71

IX 71
E009
Contacts: julien.godet

Ce système développé au laboratoire permet de combiner la microscopie à feuille de lumière à la microscopie de particule unique (SMLM, en mode PALM ou STORM). Il a été développé pour de l’imagerie bactérienne super-resolue en profondeur dans échantillons épais (études de biofilms) On peut aussi lui ajouter une tête AFM pour de l’imagerie corrélative de microscopie de fluorescence à champ large et de microscopie de force atomique.

SMLM (Single Molecule Localization Microscopy):
L’imagerie à haute résolution, la nanoscopie, permet de dépasser les barrières physiques de la diffraction en atteignant une résolution latérale de 25 nm. Dans la microscopie de localisation par photoactivation (PALM :PhotoActivated Localization Microscopy) et la microscopie par reconstruction stochastique optique (STORM: Stochastic Optical Reconstruction Microscopy), quelques molécules sont activées, imagées, puis éteintes ou photoblanchies. Une image en deçà de la limite de diffraction est alors reconstruite après avoir déterminé avec une haute précision la position de toutes les molécules individuelles.

TIRF / HILO (Total Internal Reflection Fluorescence / Highly Inclined and Laminated Optical sheet)
L’imagerie TIRF consiste à illuminer à l’angle critique de réflexion, l’échantillon est alors exité par un phénomène d’ondes évanescentes sur les 40 premiers nanomètres. L’imagerie HILO ou pseudo-tirf est un dispositif d’illumination oblique (proche de l’angle critique) permettant une imagerie en champ large sur une profondeur de champ réduite qui baisse le bruit de fond généré par les plans hors focus. Ces modes d’imagerie peuvent être utilisés conventionnellement ou en SMLM.

SPIM / LSFM (Selective Plane Illumination Microscopy / Light-Sheet Fluorescence Microcopy)
Classiquement, l’imagerie de particule unique est faite en mode TIRF ou HILO pour réduire la profondeur de champ. Ce mode présente l’inconvéniant de se limiter à une distance de travail réduite. L’association SMLM, avec un éclairage en feuille de lumière nous permet de travailler sur une épaisseur allant jusqu’à 1 µm avec une résolution maximale de 50nm.

Epifluorescence:
L’imagerie de fluorescence en champ large est réalisable en utilisant les lasers comme source d’excitation.

AFM-Fluo:
Un module de microscopie à force atomique peux être couplé au microscope de fluorescence pour de l’imagerie corrélative. L’AFM n’estpas compatible avec le Ligthsheet

Experts Scientifiques
julien.godet

Caractéristiques techniques

Modes d’acquisition
Photonique
- Microscopie en contraste de phase
- Microscopie de Fluorescence à champ large
- TIRF/HILO
- SPIM / LS
- LS- SMLM
- 3D LS SMLM

AFM
Microscopie en phase gazeuse:
- STM : Microscopie à effet Tunnel
- Atomic Force Microscopy (AFM) (contact +semicontact + noncontact)/ Lateral Force Microscopy (LFM)
- Phase Imaging mode/ Force Modulation mode/ Adhesion Force Imaging/DC & AC
Microscopie en phase liquide:
- Atomic Force Microscopie(AFM) (contact + semicontact)/ Microscopie à Force Latérale LFM
Spectroscopie:
- Imagerie Force volume
- Spectroscopie de force: courbes amplitude-distance, courbes phase-distance

Statif
Olympus IX 71

Lasers
Banc laser mutalisé avec le microscope Palm/Paint (il ne peux être utilisé que sur un seul système à la fois)
405 nm
488 nm
532 nm
561 nm
645 nm

Laser propre au SMLM/SPIM
532 nm 150mW

Objectifs disponibles (Olympus)
100X 1.49 Uapo N oil
100X 1.4 ph3

Lightsheet
Lentille cylindrique

Camera
EMCCD Andor IXon 888 Dual View Photometrics DV2 Multichannel Imaging system

Tête AFM
NT-MDT SNEMA Scanner 100µmx100µm Z scan 17 µm close loop sur les trois axes

Interface Logicielle
Microscopie photonique :
Micromanager
Microscopie de force atomique:
NOVA SPM
GWYDDION V2.10 (analyse)

N’oubliez pas de citer la plateforme dans les remerciements!